Реакция микропреципитации с кардиолипиновым

Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном (RPR) (в крови)

Общие сведения

Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном (RPR — Rapid Plasma Reagin) — скрининговый метод диагностики сифилиса, (является нетрепонемным тестом, так называемые реагиновые или кардиолипиновые тесты, которые проводят при первичном обследовании на сифилис) посредством определения реагинов — антител класса IgM и IgG (их еще называют реагины), образующихся против антигенов липидного происхождения, образовавшихся при повреждении клеток больного сифилисом или против липидных антигенов бледной трепонемы. Основные показания к применению: первичное обследование на сифилис, медицинские осмотры, контроль эффективности лечения.

RPR — первичный скрининговый тест на сифилис, выявляющий антифосфолипидные антитела (своего рода отборочный тест для последующего подробного обследования на сифилис). В настоящее время одна из классических реакций диагностики сифилиса — реакция Вассермана в лабораториях практически не выполняется. На смену этой реакции пришли новые современные методы ИФА-диагностики. Метод RPR, в какой то мере, можно рассматривать как замену реакции Вассермана. Метод RPR относится к нетрепонемным тестам. Антитела выявляемые в RPR реакции появляются, как правило, появляются в крови больного через 3-5 недель после заражения (через 10 дней после появления первичного шанкра). В первые 10 дней после появления твердого шанкра они, как правило, не обнаруживаются.

Считается, что RPR-тест положителен в 78% случаев при первичном сифилисе и в 97% случаев при вторичном сифилисе. Низкий титр реагиновых антител (менее 1:8) в первую очередь свидетельствует о ложноположительной реакции, однако такие цифры можут быть и при позднем сифилисе.

Следует учитывать, что липопротеиды трепонем и тканей человека сходны друг с другом, поэтому результаты нетрепонемных реакций могут быть в ряде случаев ложноположительными. Образовавшиеся антитела могут быть неспецифическими — их называют реагины. Они образуются на липидные антигены бледной трепонемы и против аутоантигенов, которые образуются при разрушении клеток больных. Поскольку тест не специфический, то можно ожидать получение как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов. В случае положительной реакции RPR проводят тесты — ИФА, РПГА, РИФ, РИТ. Присутствие в крови антител к фосфолипидам является одной из причин получения ложноположительных результатов в реакции преципитации с кардиолипиновым антигеном (VDRL-тест – Venereal Disease Research Laboratory). В VDRL-тесте определяют агглютинацию липидных частиц, содержащих холестерин и кардиолипин. Антитела к фосфолипидам присоединяются к кардиолипину этих частиц и вызывают их агглютинацию. Аналогичная реакция наблюдается у больных сифилисом, у которых ложноположительный характер VDRL-теста должен быть доказан отрицательными результатами специфических методов исследования на сифилис, которые выявляют непосредственно антитела к трепонемным антигенам.

Ложноположительная реакция может наблюдаться при аутоиммунных заболеваниях (системная красная волчанка, склеродермия). Ложноположительная реакция также является одним из признаков АФС (в результате повышения содержания антител к кардиолипину). Выявляются, также, больные с транзиторно-положительной реакцией, которые часто болеют вирусными и бактериальными инфекциями (мононуклеоз, лепра, малярия, боррелиоз — болезнь Лайма, корь, ветряная оспа, хламидиоз, туберкулез), при беременности.

Данные антитела у больных сифилисом образуются, как правило, в 70-80% случаев при первичном сифилисе, и практически, достигают 97% у больных со вторичным и ранним латентным сифилисом. После успешного лечения сифилиса у 90% пациентов реакция RPR становится отрицательной.

Согласно приказу МЗ РФ от 26.03.2001 г. за №87 “О совершенстовании серологической диагностики сифилиса” последовательность обследования пациентов на сифилис представляется следующим образом:

• При первичном обследовании производится постановка отборочной (скрининговой) реакции микропреципитации (РМП) или её модификации (RPR — РПР, TRUST — ТРАСТ, VDRL — ВДРЛ) в количественном и качественном вариантах и в случае положительного результата — любого специфического подтверждающего трепонемного теста (РПГА, ИФА, КСР, РИФ, РИТ).
• После окончания терапии ставится РМП или её модификация и по снижению титра судят о динамике инфекционного процесса и эффективности терапии. Подтверждением эффективности проведенной терапии считается снижение титра в 4 и более раз в течение 1 года.
• По окончанию этого срока осуществляется постановка той же специфической реакции, что и при первичном обследовании. Следует учитывать, что специфические трепонемные тесты могут оставаться положительными (не негативировать) в течение ряда лет, а в отдельных случаях остаются положительными на всю жизнь.

В настоящий момент существует множество специфических методов диагностики, которые используются при различных заболеваниях.

Одним из них является реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном, которая применяется при диагностике сифилиса.

Такая процедура отличается наибольшей достоверностью и имеет множество других преимуществ перед другими способами диагностики данного заболевания.

Причины и симптомы сифилиса

Сифилис представляет собой хроническое венерическое заболевание, которое имеет инфекционный характер.

Данная болезнь может поражать различные ткани человеческого организма, в том числе кожные покровы, слизистую оболочку, внутренние органы, хрящевые ткани, нервы.

Возбудителем заболевания является бледная спирохета. Помимо этого, спровоцировать развитие болезни могут трепонемы, которые отличаются высокой проникающей способностью и могут проходить через слизистые оболочки.

Важной особенностью сифилиса является то, что он заразен для окружающих. Передача происходит, как правило, половым путем при незащищенном половом акте. Кроме этого, инфицирование может происходить при попадании пота или слюны на слизистые оболочки, при переливании крови, через предметы личной гигиены и другие бытовые объекты.

Основные симптомы сифилиса:

• Появление твердых шанкров в районе половых органов
• Изменение цвета кожи
• Гнойные выделения из половых органов
• Образование кондилом
• Анемия
• Общее недомогание

Важно отметить, что симптомы заболевания проявляются не сразу после заражения. В большинстве случаев протекает инкубационный срок, который может длиться до 2-3 недель. Симптоматика заболевания часто зависит от локализации инфицированного места.

При отсутствии своевременного лечения сифилис переходит на поздние стадии, при которых поражение приобретает обширный характер. У больного могут деформироваться зубы, кости.

Негативному воздействию подвергаются внутренние органы, что впоследствии может спровоцировать их дисфункцию и летальный исход.

В целом, сифилис является одним из самых распространенных венерических заболеваний, которое характеризуется длительным течением и множество неприятных для пациента симптомов.

Описание реакции микропреципитации с кардиолипиновым антигеном

Процедура микроприципитации — эффективный метод диагностирования сифилиса

Представленная процедура направлена на выявление антител к кардиолипиновым антигенам, выделяемым из бледной спирохеты – возбудителя сифилиса.

Данный диагностический метод является первичным и в большинстве случаев используется для установления факта инфицирования.

В дальнейшем используются вспомогательные процедуры, направленные на определение оптимального способа лечения.

В настоящий момент процедура микроприципитации используется в комплексе диагностических процедур не только при сифилисе, но и в ходе проведения регулярных осмотров.

Показания к проведению процедуры:

• Наличие выраженных симптомов сифилиса
• Случаи незащищенного полового акта с зараженным партнером
• Планирование беременности
• Использование донорской крови
• Случаи заболевания сифилисом или других половых инфекций
• Контроль эффективности лечения

Процедура имеет широкий спектр показаний и часто назначается лицам, чья профессиональная деятельность связана с регулярными контактами с другими людьми. Диагностика может проводиться у детей, в том случае если их мать или отец были больны сифилисом до их рождения.

Проведение реакции микропреципитации назначается через 10-14 дней после появление первых шанкров. Повторный тест делается через 3-5 недель с момента предположительной даты инфицирования организма. При позднем сифилисе применение описанной процедуры является нецелесообразной ввиду того, что реактивность антигенов существенно снижается.

Для выполнения РМП в лабораторных условиях смешивают материал, предварительно забранный у пациента. При таком методе используется сыворотка крови. Ее смешивают с раствором кардиолипиновых антигенов, смешанным с холин-хлоридом. В случае, если тест положительный, в веществе наблюдается выпадение хлопьев разных размеров. При отсутствии сифилиса реакция на кардиолипиновый антиген отсутствует.

В целом, РМП – это процедура, необходимая для определение реакции на антитела, выделяемые возбудителями сифилиса, что свидетельствует о наличии инфекции в организме.

Подготовка к анализу

Правильная подготовка к проведению МРП существенно увеличивает достоверность результатов процедуры. Выполнять подготовительные меры следует при любых видах анализа крови.

Сифилис — распространенное венерическое заболевание

Перед выполнением реакции микропреципитации необходимо на некоторый промежуток времени отказаться от употребления пищи и любых напитков кроме минеральной воды. Временной промежуток между последним приемом пищи и забором материала на анализ должен составлять не менее 8 часов.

В случае если процедура назначена в период приема лекарственных средств с целью определения эффективности лечения, необходимо проконсультироваться со специалистом.

Применение пенициллина и других антибиотиков, которые часто назначаются при сифилисе, могут повлиять на достоверность процедуры.

Забор материала для процедуры микропреципитации должна осуществляться за 1-2 недели до начала медикаментозной терапии или же после их отмены. Если прекращение приема является невозможным, необходимо предупредить специалиста, при этом точно указав дозировку лекарства и схему приема.

За 1-2 дня до сдачи крови пациенту категорически противопоказаны существенные физические нагрузку. Помимо этого, недопустимым является употребление алкогольных напитков, жирной или жареной пищи. Рекомендуется ограничить потребление кофеина и других веществ, которые могут влиять на качественные характеристики крови.

Забор материала для теста осуществляется, как правило, в утреннее время суток. Для процедуры микопреципитации используется сыворотка, которая получается в результате очистки крови от некоторых структурных компонентов.

В большинстве случаев, получить результаты исследования можно через 1-2 дня с момента забора крови на анализ. В случае положительной реакции, пациенту назначается необходимое количество инъекций, а также вспомогательные лекарственные средства и процедуры.

Перед проведением РМП очень важно соблюдать ряд ограничений и подготовительных мер, так как это способствует получению более достоверного результата.

Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном – один из ранних диагностических методов, применяемых для выявления инфекции, вызывающей развитие сифилиса. Процедура отличается высокой достоверностью, однако ее применение целесообразно только при первичном сифилисе, так как при вторичной и третичной форме болезни вероятность положительного результате значительно снижается.

На видео — важная информация:

Кардиолипиновый антиген представляет собой липидоподобное вещество. По своему составу оно похоже на белки возбудителя сифилиса — бледной трепонемы. Такой препарат используют для ранней диагностики этого опасного венерического заболевания. Он позволяет выявить патологию на ранних стадиях.

На исследование берут венозную кровь и смешивают с кардиолипиновым антигеном. Реакция взаимодействия биоматериала и препарата называется микропреципитацией (РМП). Если человек здоров, то его кровь не вырабатывает антитела к антигену. Если же пациент страдает сифилисом, то в его организме активно образуются иммуноглобулины класса M и G. В этом случае в смеси крови и препарата появляются хлопья. Этот осадок представляет собой скопление комплексов «антиген-антитело» (преципитат).

Образование иммуноглобулинов у зараженного человека начинается через 7-10 дней после появления шанкра (безболезненной язвы) на коже или слизистой. Это ранний симптом сифилиса. Обычно выработка антител наблюдается через 2-3 недели после инфицирования.

Для проведения теста используют набор «Кардиолипиновый антиген». Его получают из бычьего сердца. Экстракт органа смешивают с холестерином и лецитином. Полученное вещество обладает схожими свойствами с протеинами бледной трепонемы. Оно способно вызывать образование иммуноглобулинов при реакции с кровью больного сифилисом.

Показания

Анализ с кардиолипиновым антигеном назначают в следующих случаях:

• при наличии незащищенных половых контактов пациента со случайными партнерами;
• при бытовых контактах с больными сифилисом;
• при симптомах первичной и вторичной стадии сифилиса (шанкре, высыпаниях на теле);
• при подозрении на нейросифилис (психических и неврологических нарушениях);
• детям, рожденным инфицированными женщинами;
• для контроля эффективности противосифилитической терапии.

Этот тест не всегда бывает информативен при запущенных (третичных) формах патологии. На поздних стадиях сифилиса выработка антител существенно снижена.

Пробу с кардиолипиновым антигеном обязательно сдают во время беременности. Кроме этого, такое исследование требуется пройти донорам и людям, оформляющим медицинскую книжку.

Как проводится исследование?

Очень важно тщательно подготовиться к анализу. Этот тест довольно часто дает ложноположительные результаты. За двое суток до сдачи крови нужно полностью исключить:

• употребление спиртных напитков (даже слабоалкогольных);
• прием препаратов с наперстянкой;
• жирную пищу.

Анализ нужно сдавать утром натощак. На исследование берут 8-10 мл венозной крови. Результаты теста обычно бывают готовы через 1-2 дня.

Норма

Если пациент не страдает сифилисом, то его кровь не вступает в реакцию с кардиолипиновым антигеном. Отрицательный результат анализа в большинстве случаев означает, что человек здоров. В расшифровке теста это обозначается знаком «-» или «RW-«. Это считается нормой.

Однако даже при отрицательных результатах теста нельзя полностью исключать, что человек инфицирован бледной трепонемой. Ведь антитела не вырабатываются в инкубационный период патологии. Очень слабое продуцирование иммуноглобулинов отмечается и при третичной форме сифилиса. Поэтому если у человека при отрицательной реакции Вассермана имеются признаки патологии, то анализ назначают повторно.

Возможные отклонения

Рассмотрим расшифровку анализа. Выраженность положительной реакции обозначена в бланке с результатами пробы знаками «+». Отклонениями от нормы считаются следующие данные теста:

• «+ » — сомнительный результат (рекомендуется пересдать анализ).
• «++» — слабоположительная реакция.
• «+++» — положительный результат.
• «++++» — резко положительная проба.

Что делать, если проба с кардиолипином дала положительные результаты? Диагноз «сифилис» обычно не ставится только лишь по реакции Вассермана. В этом случае врачи всегда назначают дополнительные исследования.

Этот тест в 70 % случаев позволяет выявить первичную стадию сифилиса, и в 100 % случаев показывает вторичную форму болезни. Однако положительные результаты исследования не всегда свидетельствуют об инфицировании бледной трепонемой. На данные этого анализа могут повлиять многие факторы. Они будут рассмотрены далее.

Ложные результаты

Нередко бывают случаи, когда проба Вассермана показывает образование антител, однако при этом человек не страдает сифилисом. Ложная положительная реакция отмечается при следующих заболеваниях и состояниях:

• беременности;
• инфекционном мононуклеозе;
• подагре;
• сахарном диабете;
• малярии;
• кори;
• скарлатине;
• бруцеллезе;
• пневмонии;
• хламидиозе;
• микоплазменной инфекции;
• вирусном гепатите;
• туберкулезе;
• злокачественных опухолях;
• тиреоидите;
• аутоиммунных болезнях (системной красной волчанке, склеродермии, ревматоидном артрите);
• инфицировании энтеровирусами;
• недавней вакцинации;
• у пациентов старческого возраста (в 10 % случаев);
• употреблении алкоголя накануне исследования;
• наркотической зависимости.

Можно сделать вывод, что перечень заболеваний и состояний, при которых отмечаются ложные результаты теста, довольно обширен. Поэтому для постановки точного диагноза назначают иммунофлюоресцентный анализ крови. Он позволяет более достоверно выявить наличие иммуноглобулинов G к бледной трепонеме. Проводят также анализ крови методом ПЦР-диагностики. Он показывает наличие у пациента фрагментов ДНК бледной трепонемы. Окончательный диагноз врач ставит только на основании комплексного исследования.

«>

Частые вопросы

Как происходит реакция микропреципитации с кардиолипиновым антителом?

Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антителом происходит при смешивании сыворотки с раствором кардиолипина и последующим образованием мелких преципитатов, которые можно визуализировать под микроскопом.

Какие методы используются для диагностики антител к кардиолипину через реакцию микропреципитации?

Для диагностики антител к кардиолипину через реакцию микропреципитации используются методы, такие как турбидиметрия и нефелометрия, которые позволяют количественно оценить образование преципитатов.

В каких областях применяется реакция микропреципитации с кардиолипиновым антителом?

Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антителом широко применяется в медицинской диагностике для выявления антител, связанных с аутоиммунными заболеваниями, такими как системная красная волчанка и антифосфолипидный синдром.

Полезные советы

СОВЕТ №1

При работе с реакцией микропреципитации с кардиолипиновым важно тщательно следить за температурным режимом. Реакция может быть чувствительна к изменениям температуры, поэтому рекомендуется проводить ее при постоянной и контролируемой температуре.

СОВЕТ №2

Для достижения точных результатов при реакции микропреципитации с кардиолипиновым необходимо строго соблюдать пропорции реагентов. Дозирование и смешивание компонентов должно происходить с высокой точностью, чтобы избежать искажения результатов.

СОВЕТ №3

Перед проведением реакции микропреципитации с кардиолипиновым рекомендуется тщательно очистить и подготовить все используемые стеклянные посуды и инструменты. Даже небольшие загрязнения могут повлиять на результаты реакции, поэтому гигиеничность и чистота играют важную роль.